如何“唤醒”冷冻胚胎?
胚胎的解冻与冷冻相反,是将胚胎从超低温状态下恢复至正常生理状态的过程。
解冻主要有两个过程,一个是复温,一个是去除冷冻保护剂,最终达到恢复胚胎生理活性及继续发育的目的。复温一般采用较快的升温速度,避免在中间产生一些冰晶对胚胎造成损伤,胚胎冷冻时,胚胎中渗透了高浓度的冷冻保护剂,复温后需及时将其去除,使水分能替代保护剂渗入细胞内,因此解冻剂中含有一些非渗透性保护剂,胚胎可逐步吸收水分,并将冷冻剂从胚胎细胞中渗出,且不会因水分吸收过快而导致细胞膜内外渗透压剧烈变化,对胚胎造成损伤。
胚胎解冻时选择何种方法需依据胚胎冷冻时选择的方法,不同的冷冻方法不仅冷冻原理有差别,且胚胎装载的方式也完全不同,因此解冻时也需采用不同的解冻方法和程序,如胚胎冷冻常用两种方法,一种是程序冷冻法,一种是玻璃化冷冻法。在程序冷冻法中,胚胎是装载在充满冷冻液的冷冻管中,降温过程也是按照一定的速率较缓慢的降到一个稳定的温度,约在-35℃到-80℃之间,再投入液氮,整个过程大概需两个小时,解冻时也需用程序的解冻法,复温的速度虽要求较快,但为避免体积和温度急剧变化导致胚胎受损,则需将冷冻管从液氮取出后,先在空气中停留一段时间,然后再升温到37℃,而玻璃化冷冻时,胚胎是在高浓度的冷冻保护剂中进行短时间平衡后,使用极少量的保护剂,再将它们装载在导热性较好的载体上,直接被投入液氮中,胚胎瞬间被冷冻,从生理温度降至-196℃,整个冷冻过程仅7-8分钟,玻璃化解冻时复苏温度也极快,胚胎从液氮中取出后,立即从-196℃直接升温至生理温度。
总之,解冻方法需与冷冻时的方法相对应,这样更有利于胚胎的复苏及生理功能的恢复,不恰当的复苏方法会对胚胎造成较大的损伤。
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